|
, o) j, w) o* z
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是色谱法的一个重要分支，应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80%则需用高效液相色谱来分析。HPLC具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点，已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
0 j- ~1 F G3 B1 K' U' j: ~/ D N3 u
U( C( W, P4 D8 E. u 1
9 t1 y9 C3 ^- J) w" h4 N/ P 基本原理 + t2 ^& C' v% Y: u5 m$ E2 C
色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationphase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。高效液相色谱法以经典的液相色谱为基础，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有颗粒极细的高效固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
& F M" Z7 @5 T* g
9 M; B7 f* o% r 图1.高效液相色谱仪分析流程
8 ^$ t8 g2 |7 ~1 W T! W) @8 p' J6 e 2 2 y6 q* _) Z4 v2 ~% C6 d1 Y3 o
系统组成 . _/ P2 S) m8 b) }6 z$ g2 P5 T' n
HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。此外，还可根据需要配置梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。
( q& K/ m2 F [5 e/ y# k 0 X) q+ l% b. {
图2.高效液相色谱仪的系统组成1.输液系统输液泵是HPLC 系统中最重要的部件之一。输液泵按照输出液恒定的因素分为恒压泵和恒流泵，泵的性能好坏直接
: J' M) w1 g0 U& M w& L
4 N7 |( n W( u% a: l, t# T. }/ V( `* J/ C
& R. T5 W/ l" W7 c
) o) V" e a c: F- y0 v& ]
| 
