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5 r6 M3 ?$ x4 V H% i3 ] 虹彩病毒是变温脊椎动物的一种重要病原体，被认为是对水产养殖鱼类生产的一个重大威胁。其中，大黄鱼虹彩病毒自2003年首次被报道以来，由于缺乏合适的细胞培养模型，研究进展缓慢。近日，凌恩生物客户浙江省海洋水产研究所及福建农林大学发表文章“Genetic and Pathogenic Characterization of a New Iridovirus Isolated from Cage-Cultured Large Yellow Croaker (Larimichthys crocea) in China”，组装获得了大黄鱼（Larimichthys crocea）中虹彩病毒基因组，并首次对大黄鱼中虹彩病毒的遗传和致病性特征化进行系统研究，扩展了研究人员对虹彩病毒的了解。
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. r% P7 h; C, ~ 发表期刊：Viruses（IF=5.818） # a$ `& k# e$ h
发表时间：2022
: U! ^ l( @9 a 样本类型：大黄鱼的鳃、脾脏和肾脏的组织样本 , _* `! Z+ R+ h
作者单位：浙江省海洋水产研究所&福建农林大学
+ h8 @7 K3 f. Y2 _: N7 Q 实验方法：电镜观察、病毒基因组测序等 + c- k1 E0 l" v! ^# t
主要结果
9 L8 D& t$ M2 T2 ?2 [/ S: T' S 1、病原体的鉴定
3 B! g/ o; O" r" e5 o 根据电镜结果，细胞质中有大量的病毒颗粒。病毒颗粒直径为150-200 nm，具有电子致密核心（图1）。qPCR结果表明，6条感染鱼中有3条对大黄鱼虹彩病毒（LYCIV）呈阳性，Ct值分别为28.11、23.76和31.30。其余三个样品的Ct值分别为0、36.76和37.84。 & D/ X% J! y$ h8 s. T0 ^! o
图1 脾脏组织细胞中病毒颗粒的电镜图。A，多个病毒在同一个细胞中；B，在放大的图像中可见成熟病毒粒子的外膜和中央电子透光核。2、病毒基因组测序和系统发育分析 % P6 w- }, x: g: e
本研究组装得到病毒基因组（NCBI登录号：MW139932）全长为112,043 bp，GC含量为53.5%（表1）。共鉴定出120个ORF在有义（R）和反义（L）DNA链上编码45-1169个氨基酸的蛋白质。其中43个基因与其他虹彩病毒的基因高度同源，并具有明确的功能（图2）。 ( B4 Z6 F0 g# G* {( \9 j
表1 LYCIV-ZS-2020全长基因组的核苷酸鉴定图2 LYCIV-ZS-2020基因组结构系统发育进化树结果表明，本研究获得的病毒与鲳鲹虹彩病毒系统发育紧密聚集，形成了在亚洲分离的其他海洋鱼类虹彩病毒属中的病毒的亚系（图3），将这种新型病毒命名为大黄鱼虹彩病毒Larimichthys crocea IridovirusZS-2020（LYCIV-ZS-2020）。
+ V' j% `, ?: K" f 图3 LYCIV-ZS-2020和其他代表性虹彩病毒进行系统发育树分析3、MCP的原核表达和纯化以及特异性抗体的产生
0 _$ h/ F; \2 q- P9 H SDS-PAGE和蛋白质印迹（WB）分析结果表明，MCP蛋白分子量约为50 kDa。免疫荧光法（IFA）显示pcDNA-3.1-MCP重组质粒转染细胞有特异性荧光，而免疫前血清转染细胞中未检测到信号（图4）。
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) u- k! u l' p- t7 Y1 F( D: R 图4 LYCIVMCP蛋白的表达及抗体的制备4、LYCIV-ZS-2020在大黄鱼中的致病性 / z1 t" e, ~. N2 C' y6 D, n
感染LYCIV-ZS-2020的大黄鱼组显示累积死亡率为52%，主要在注射后4至9天死亡。在模拟感染组中，在注射后9，10和12天死亡（图5A）。通过qPCR对组织样本的分析显示，在感染鱼类的脾脏、肾脏、鳃和头肾中检测到LYCIV，在注射后14天内可持续检测到相当数量的病毒基因组拷贝。
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1 [1 T1 C( |; j7 x 小结
0 {) t% v3 w4 @2 S U 本研究鉴定出一个新的大黄鱼虹彩病毒株，完成了其全基因组测序，并开展了致病性研究，为大黄鱼虹彩病毒防控奠定了理论基础和数据支持。
. Z3 c: t6 R" M 凌恩生物具有丰富的病毒基因组项目经验，目前已成功完成猫冠状病毒、疱疹病毒基因组等项目，可以对全新的病毒进行测序分析，利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因组序列，解析编码信息，并获得相应的变异信息，多种基因预测软件+人工校正确保基因预测结果更加准确！更有比较基因组分析等满足个性化科研分析要求！
4 e: k: E) W4 U8 D' m) O 参考文献：Genetic and Pathogenic Characterization of a New Iridovirus Isolated from Cage-Cultured Large Yellow Croaker (Larimichthys crocea) in China.
. _6 E+ W) X/ t, y# |$ i9 N DOI: 10.3390/v14020208 4 T. x8 Y0 ]0 D
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