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原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试 4 l* j j6 Q* h3 J+ n4 ~' L" f
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彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。 + d" ?/ N( S9 {6 f6 l' s
艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒: # V6 o6 m2 b, N$ L: l
目录号:D-AKE3040 " M# h6 D7 o8 `$ O
尺寸:15T $ }1 d) [ R. ^: C3 L
储存:在4°C下储存6个月,避光
9 N% |5 `* i9 K; r" \, n* E. N9 Z 彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片): ( K$ ^2 ^* m1 W5 h+ ^
套件组件尺寸(15T)储存条件
, c5 K, W+ l& z 彗星载玻片(3孔)5 4℃
T# X% L. p9 r 10×赖氨酸溶液15 mL 4℃ 6 X+ B8 R& [, _5 O
EDTA(500 mM)25 mL 4℃ : U$ Z: {3 S* J M% l4 T5 [. ^
琼脂(低熔点)15 mL 4℃
3 n" \! m. K* Z' Y 碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光
$ w' M/ J6 r O7 g( r1 V: O 40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃ / J8 c1 }* k7 O* A( v
彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备: 0 ~" R/ [$ {% f' W8 n
彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。 : y5 l3 ?0 X- J8 }1 H
琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
9 f) a3 [: S' A7 T 碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。
! {7 x! e+ {# }$ n. }! w 40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。
" ]" a! Y" C2 N# C4 F4 c3 X# K 1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液 ! x% u$ o, z% j M* v6 E" d9 @, Y
可以使用以下方法之一测量尾力矩: 9 R7 {% X9 O8 t% R+ s; d
(a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1) " _& ]- R! w4 B6 P
(b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。
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3 |4 y. {- S! @6 m 图1:彗星试验中的DNA损伤。 5 N4 c4 I l3 L: V/ ]0 l
图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级 ; F. g T5 ^, X4 ~. N) s
该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多 / @" h. N' L; e* O+ Q3 W
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责任编辑: 6 V8 B9 p6 A+ x
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