$ B6 k) f% U* X) R+ c7 i 原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试 7 k4 A) U! H- Q; O0 g7 V
* F' W/ P. p5 c5 M( F
彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。
* b! T' n: d2 o% s 艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒:
) J/ U4 q% M6 y( S2 v 目录号:D-AKE3040
* h1 K( m' Z: d' A" k 尺寸:15T
/ O% t: U* Z3 u( A& w 储存:在4°C下储存6个月,避光
) [, }. K4 \# e+ f: t 彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片): $ @: E7 a" E( K$ w' q) h3 b
套件组件尺寸(15T)储存条件
) d+ A. u* r# Z& I0 |/ Q3 w 彗星载玻片(3孔)5 4℃
6 u) |- K- d2 l& g 10×赖氨酸溶液15 mL 4℃
( Q# F* e5 t1 t% d4 ?* m/ a EDTA(500 mM)25 mL 4℃ 3 x4 _$ E# \4 j+ ^4 c% |
琼脂(低熔点)15 mL 4℃ 1 j/ C* D& [3 p4 M2 l1 n0 {
碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光 0 B% s" I- j' d
40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃
' b! n' L% D+ a" T; q0 q2 D 彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备: ; j, ]- v6 n) G2 a% D
彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。 4 }5 {* J# J8 O" g0 P1 s
琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
* R# y2 t5 r) ?1 |2 \' w8 _" y% [. B4 ` 碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。 , I; j5 T V$ m+ ?
40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。
N+ N- d5 T7 P, y, F 1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液
' o( J. O$ E$ h% T 可以使用以下方法之一测量尾力矩:
* j, Y5 e3 ~. b" ` S' M (a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1)
; L$ [4 T# ^; N/ V (b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。
; n/ q) N( r2 I9 h. N& h8 r - l! Q9 m% u0 w. {0 K' {% S
图1:彗星试验中的DNA损伤。
- m9 ^8 K8 A3 r3 }" v! y. f& p 图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级
1 R: F9 o9 Q0 ^ 该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多
$ F6 V- _1 ^% g; K P
1 E, U/ E# W9 {' s } 责任编辑:
9 W4 i2 C4 `+ I! M- s/ p3 A* T% O# {0 x+ G' h* b R3 b7 Y0 p) j6 W
1 }! i* G4 c$ H4 l/ J k# z& [0 Y
1 c- Z" ?4 J& f# D7 U+ T( P
1 Q! M' x4 a) w) l Z |