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- H! ~. f# y4 y7 }* W 原标题:彗星法DNA损伤分析试剂盒,快速灵敏测试
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2 w/ x" Y7 t5 d1 Q, h$ D1 J$ h( j 彗星检测试剂盒(3孔载玻片)是一种单细胞凝胶电泳检测(SCGE),用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是,在器官或组织遭受(如辐射、重金属等)后,细胞中的单链或双链DNA断裂,将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上,然后用裂解溶液破坏细胞膜,用碱性溶液解开DNA。最后,对样品进行电泳,在电场的作用下,正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离,完整的DNA保留在细胞核的范围内,DNA碎片从细胞核中迁移出来,用PI染料染色,在荧光显微镜下观察,完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状;DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值,可分为中性彗星试验(pH=8.4)和碱性彗星试验(pH>13)。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤,碱性彗星法具有较高的灵敏度,可用于检测较少的单链和双链断裂损害。 9 Y2 Q3 f2 t j; N7 d
艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒:
6 j7 B% ]! J* s8 x Q 目录号:D-AKE3040 # t+ _6 x/ \; t0 r, v5 Z
尺寸:15T
* }' a8 c& z4 |1 y; n/ ^6 ] 储存:在4°C下储存6个月,避光
9 m3 ~. ?8 M0 M, k: r 彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片):
- `: I0 f+ D; ?$ t. k( ] 套件组件尺寸(15T)储存条件 6 t3 u# G7 P4 o
彗星载玻片(3孔)5 4℃ * E3 \2 g2 k% _) V
10×赖氨酸溶液15 mL 4℃ . h4 p8 s' W- u- L
EDTA(500 mM)25 mL 4℃ % F9 J6 Z0 y2 L" v2 |8 B
琼脂(低熔点)15 mL 4℃ ' H$ L2 [9 ^6 l
碘化丙啶(PI)(50x)20μL 4℃,避光
1 D& y& T# }$ S* ]& [0 ^ 40 mM Tris-HCl(pH 7.5)15 mL 4℃
4 \ h+ R1 q. I2 i$ Z1 f 彗星法DNA损伤分析试剂盒试剂准备:
" P* t4 d5 ]% u7 v) ^ 彗星幻灯片(3孔):随附随用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。10×赖氨酸溶液:供应即用。使用前将其平衡至室温。在4℃下储存。EDTA(500mM):供应时即用。使用前将其平衡至室温。储存温度为4℃。
* K# V6 q- X/ K# U+ U 琼脂(低熔点):将琼脂(低沸点)瓶在90-95°C的水浴中加热20min,直到琼脂液化。将瓶子转移到37°C水浴中20分钟以保持液态。将其余部分等分并在4℃下储存。
* W; V) v9 G* g2 q9 W& i7 @, l 碘化丙啶(PI)(50×):使用前新鲜制备,用PBS稀释50倍至1×PI染料浓度,在4°C下储存并避光。 7 ]. `# G1 i1 S9 X" P% m5 h& @5 l
40 mM Tris-HCl(pH 7.5):在使用前制备,用PBS稀释100倍至0.4 mM Tris-HCl(pH7.5)的浓度,并在4°C下储存。 3 g4 K. t( i m) e. o+ Y* }
1×裂解缓冲液:制备100 mL 1×裂解液 - K" J5 S5 U6 S# e N
可以使用以下方法之一测量尾力矩:
* E( @0 |# E: G9 ^! d# x (a) 橄榄尾力矩=尾DNA%×尾力矩长度(从头部中心到尾部中心测量,见图1) $ m# K$ p; ] z
(b) Extent Tail Moment=Tail DNA%×Tail Length(见图1)彗星测定结果分析软件可通过Opencomet、CASPlab和彗星测定IV(PerceptiveInstruments)等获得。
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图1:彗星试验中的DNA损伤。 ! y8 @8 H# Z3 z. @# S+ F7 F! Y
图2:定性方法:DNA损伤按尾DNA%的比例分为五级
, I4 P5 m! r8 ^. v3 k 该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。返回搜狐,查看更多
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